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免疫親和柱采用高特異性的單克隆抗體,能夠簡單高效的分離和純化食品和飼料中的霉菌毒素,同時具有高滲透性、無需附加壓力、低損耗等特點。測定的基礎是抗原抗體反應,抗體連接在柱體內(nèi),樣品經(jīng)過提取、稀釋,緩慢的通過親和柱,在柱內(nèi)河豚的毒素與抗體結合,之后洗滌除去沒有被結合的其他無關物質。用洗脫液洗脫河豚的毒素,然后注入到分析儀器中用于檢測。
免疫親和柱的特點:
1、采用單克隆免疫技術,可以有效性地將待測成分分離出來,分離效率和回收率高,正確性和可靠性強
2、實驗穩(wěn)定性好,重復性強。
3、純化過程簡單快速,短時間即可處理大量樣品
4、實驗設備輕便,自動化程度高,操作簡單,對實驗人員要求不高,可在小型試驗場所使用。
5、無需有毒溶劑,實驗過程安全可靠。
6、應用范圍廣,可處理多種復雜樣品。
免疫親和柱的操作流程:
①提取:參照GB5009.118-2016中各法,對樣品進行處理。
②凈化:以GB5009.118-2016為例說明
(1)柱子預處理:取出親和柱,恢復至室溫,將上端塞子取出,打開下端堵頭,將柱內(nèi)保存液流掉至高于凝膠上界面3-5mm處,停止流液。
(2)加樣:加入處理好的提取濾液,打開下端堵頭,調(diào)節(jié)流速至1滴/秒,直至空氣進入親和柱中,棄去流出液。
(3)淋洗:液體*排凈后,用蒸餾水,淋洗,流速為1-2滴/秒,棄掉流出液,抽干。
(4)洗脫:加入甲醇(色譜級),調(diào)節(jié)流速為1滴/秒,緩慢洗脫,收集全部洗脫液,用甲醇(色譜級)定容至(即為凈化后的樣品)。
(5)衍生:將凈化后樣品在50℃下用氮氣吹干,加入二甲基氨基吡啶溶液和蒽腈溶液,在渦旋混合器上混勻,50℃反應,在冰水中冷卻后取出,50℃氮氣吹干,用流動相溶解,待檢測。
③檢測
凈化后樣品可直接用HPLC(高效液相色譜法)、GC-MS(氣相色譜-質譜聯(lián)用儀)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)等方法進行檢測。
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